菌落PCR基因组模板快速制备方法

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主笔：赵书雪、于浩

注意事项

1、本方法适合于酵母单菌落、蘑菇菌丝、蘑菇子实体、蘑菇晒干子实体等真菌样品的菌液PCR。

2、取蘑菇菌丝时，菌丝要求极少即可（肉眼看见就行），不要加入培养基；取蘑菇子实体时，用镊子取少量于离心管中，裂解时间可以适当加长；裂解酵母细胞时，肉眼看见浑浊即可，菌体不宜过多；晒干样品取组织的时候要尽量磨碎再加入。

3、金属提前打开设置到99摄氏度（使用水浴锅一定要防止污染）。

4、离心管加热过程，盖子容易崩开，必须要加离心管夹。

1、细胞裂解液（配方详见：常见缓冲液配置方法）

2、Taq酶，无菌超纯水，引物

3、移液枪、吸头、0.5 mL离心管（1.5 mL也行）、冰盒

4、金属浴，PCR仪

所有步骤必须要更换吸头，养成习惯，加相同的溶液，加ddH2O也要换吸头。

1、加入30 μL 细胞裂解液至0.5 mL离心管中（如果没有用1.5 mL离心管也行）（样品多可以多加点裂解液，如果使用1.5 mL离心管建议加30 μL）。

这里不使用0.2 mL离心管是因为没有0.2 mL离心管配套的离心管夹（防爆夹），并不是0.2 mL离心管不可以使用。

2、取待裂解样品少许至细胞裂解液中。

3、将离心管夹夹到离心管上面，将离心管放于金属浴中，99摄氏度反应25 min，中间取出快速混匀2次，防止菌体沉淀裂解不完全。

4、25 min后，取出离心管，裂解液即为基因组模板。

5、按照25~30 μL 体系加入1 μL 的基因组模板，进行PCR。