菌丝接种液体培养基操作流程（匀浆接种法）

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主笔：刘龙语、于浩

注意事项

1、由于食用菌在液体生长的过程中会形成大小不一的菌球（见下图），如果不进行破碎直接接种菌球，无法保证接种后每瓶的接种量和种子完全一致，对于需要定量的实验有显著英系那个，因此需要将菌球破碎后进行接种。

2、可以将菌球放到装有玻璃珠（20个6 mm）的灭菌后的50 mL离心管中，利用手摇的方式破碎，这样大的菌球会被打碎，而且菌丝基本不会受到损伤，接种后菌丝生长迅速，是一种简易的破碎接种的好方法。但是该方法破碎后的菌丝体并不均匀，因此平时接种简易使用该方法，严格定量实验不建议使用。

3、利用匀浆仪接种是一种能够准确定量的接种方法。但是高速匀浆会破坏菌丝，匀浆时间越长菌丝均匀度越好，但是菌丝破坏程度越大，接种后延滞期越长，需综合考虑匀浆效果和破坏程度，本方法采用匀浆5 s的这个标准，是经过预实验后综合考虑的结果。

下面是玻璃珠接种和匀浆接种的比较：

1、种子培养基

平板固体菌种（最好是刚刚长满平板）、液体培养菌种（刚刚生长至稳定期）
2、仪器设备

匀浆机（配250 mL匀浆杯）

1、匀浆杯装在食用菌栽培袋中（聚丙烯灭菌袋）高压蒸汽灭菌（灭菌时匀浆杯杯口旋松）。

2、匀浆接种法要求菌丝体尽可能刚刚长满平板，这样可以保证最大接种量（不长满平板也可以），将全部的固体培养基在无菌条件下转移到匀浆杯中，加入50 mL的液体培养基（或者无菌水）。

3、匀浆5 s，利用5 mL或者10 mL的移液枪将匀浆后的种子培养液接种到新的液体培养基中，一般情况下每瓶接种5 mL（100 mL液体培养基）。

注意5 mL/10 mL的枪头顶部需要塞上棉花，以防止污染，枪头尖部用剪刀剪去一部分，将孔径变大。

传统的平板菌种接种液体培养基是利用打孔器或者1 mL枪头在菌丝体的边缘打孔，接种5-10个菌丝块到液体培养基中。

1、匀浆杯装在食用菌栽培袋中（聚丙烯灭菌袋）高压蒸汽灭菌（灭菌时匀浆杯杯口旋松）。

2、种子培养基尽可能刚刚长到最大生物量（稳定期），这样可以保证菌丝活性最高而且最大接种量，将50-100 mL培养基在无菌条件下转移到匀浆杯中。

3、匀浆5 s，利用5 mL或者10 mL的移液枪将匀浆后的种子培养液接种到新的液体培养基中，一般情况下每瓶接种5 mL（100 mL液体培养基）。

注意5 mL/10 mL的枪头顶部需要塞上棉花，以防止污染，枪头尖部用剪刀剪去一部分，将孔径变大。