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主笔:刘龙语、于浩
注意事项
1、由于食用菌在液体生长的过程中会形成大小不一的菌球(见下图),如果不进行破碎直接接种菌球,无法保证接种后每瓶的接种量和种子完全一致,对于需要定量的实验有显著英系那个,因此需要将菌球破碎后进行接种。
2、可以将菌球放到装有玻璃珠(20个6 mm)的灭菌后的50 mL离心管中,利用手摇的方式破碎,这样大的菌球会被打碎,而且菌丝基本不会受到损伤,接种后菌丝生长迅速,是一种简易的破碎接种的好方法。但是该方法破碎后的菌丝体并不均匀,因此平时接种简易使用该方法,严格定量实验不建议使用。
3、利用匀浆仪接种是一种能够准确定量的接种方法。但是高速匀浆会破坏菌丝,匀浆时间越长菌丝均匀度越好,但是菌丝破坏程度越大,接种后延滞期越长,需综合考虑匀浆效果和破坏程度,本方法采用匀浆5 s的这个标准,是经过预实验后综合考虑的结果。
下面是玻璃珠接种和匀浆接种的比较:
一、实验准备
1、种子培养基
平板固体菌种(最好是刚刚长满平板)、液体培养菌种(刚刚生长至稳定期)
2、仪器设备
匀浆机(配250 mL匀浆杯)
二、实验方法
(一)平板菌种接种液体培养基
1、匀浆杯装在食用菌栽培袋中(聚丙烯灭菌袋)高压蒸汽灭菌(灭菌时匀浆杯杯口旋松)。
2、匀浆接种法要求菌丝体尽可能刚刚长满平板,这样可以保证最大接种量(不长满平板也可以),将全部的固体培养基在无菌条件下转移到匀浆杯中,加入50 mL的液体培养基(或者无菌水)。
3、匀浆5 s,利用5 mL或者10 mL的移液枪将匀浆后的种子培养液接种到新的液体培养基中,一般情况下每瓶接种5 mL(100 mL液体培养基)。
注意5 mL/10 mL的枪头顶部需要塞上棉花,以防止污染,枪头尖部用剪刀剪去一部分,将孔径变大。
传统的平板菌种接种液体培养基是利用打孔器或者1 mL枪头在菌丝体的边缘打孔,接种5-10个菌丝块到液体培养基中。
(二)液体菌种接种液体培养基
1、匀浆杯装在食用菌栽培袋中(聚丙烯灭菌袋)高压蒸汽灭菌(灭菌时匀浆杯杯口旋松)。
2、种子培养基尽可能刚刚长到最大生物量(稳定期),这样可以保证菌丝活性最高而且最大接种量,将50-100 mL培养基在无菌条件下转移到匀浆杯中。
3、匀浆5 s,利用5 mL或者10 mL的移液枪将匀浆后的种子培养液接种到新的液体培养基中,一般情况下每瓶接种5 mL(100 mL液体培养基)。
注意5 mL/10 mL的枪头顶部需要塞上棉花,以防止污染,枪头尖部用剪刀剪去一部分,将孔径变大。
实验记录
种子培养基是什么 | 匀浆时间(默认5s) | 培养基类型 | 接种量 | 三角瓶标记 |
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