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注意事项
大家使用的时候从公共试剂处取用,用多少拿多少,使用完毕后放到自己冰箱,不得将使用后的放回公共冰箱。
用多少拿多少,自己冰箱里面不得存放超过2支的量。
如果发现公共冰箱中抗生素数量不足,跟负责试剂的同学说一下,按照公共试剂配置规范来进行配置,并进行登记。
抗生素配置
Amp100(氨苄青霉素,ampicillin,Amp)
常用工作浓度:100 μg/mL
配置储存液浓度:100 mg/mL(1000×)
储存液配置:☛
准确称取3.0 g氨苄青霉素钠盐加入到洗干净的50 mL离心管中,加入30 mL超纯水,利用生工0.22 μm滤膜进行过滤除菌。
分装成1 mL/管 小份,于-20 °C贮存。
小离心管标记方法如下:
离心管正面:Amp100
离心管侧面:配置人缩写+配置年月
Kan50(卡那霉素,kanamycin,Kan)
常用工作浓度:50 μg/mL
配置储存液浓度:50 mg/mL(1000×)
储存液配置:☛
准确称取1.5 g卡那霉素加入到洗干净的50 mL离心管中,加入30 mL超纯水,利用生工0.22 μm滤膜进行过滤除菌。
分装成1 mL/管 小份,于-20 °C贮存。
小离心管标记方法如下:
离心管正面:Kan50
离心管侧面:配置人缩写+配置年月
Rif50(利福平,Rifampicin,Rif)
常用工作浓度:50 μg/mL
配置储存液浓度:50 mg/mL(1000×)
储存液配置:☛
超净台中:0.5 g Rif 溶于10 mL DMSO(二甲基亚枫)
分装至1.5 mL灭菌离心管中,每管分装0.5 mL,用铝箔包裹装液管以免溶液见光,保存于-20℃。
小离心管标记方法如下:
离心管正面:Rif50
离心管侧面:配置人缩写+配置年月
铝箔纸外面标记:R
CPL25(氯霉素,chloramphenico,CPL)
常用工作浓度:25 μg/mL
配置储存液浓度:25 mg/mL(1000×)常以12.5 ug/ml~25 ug/ml的终浓度添加于生长培养基
储存液配置:☛
准确称取0.25 g氯霉素,加入洗干净的15 mL离心管中,加入10 mL无水乙醇,无需过滤,超净台中操作。
分装成0.5 mL小份,于-20°C贮存。
小离心管标记方法如下:
离心管正面:CPL25
离心管侧面:配置人缩写+配置年月
Tet20(四环素,tetracyyline,Tet)
常用工作浓度:20 μg/mL
配置储存液浓度:20 mg/mL(1000×)常以10 ug/ml~50 ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
储存液配置:☛
溶解0.4 g 盐酸四环素加入到洗干净的50 mL离心管中,加入20 mL 70%乙醇,利用生工0.22 μm滤膜进行过滤除菌。
分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光,于-20 °C贮存,每管0.6 mL。
小离心管标记方法如下:
离心管正面:Tet20
离心管侧面:配置人缩写+配置年月
生化试剂
1 M IPTG溶液
IPTG为异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(分子量为238.3)
【1 M母液配制方法】:在10 ml蒸馏水中溶解2.4 g IPTG后,用0.22 μm针式滤器过滤除菌,分装成1 mL小份贮存于-20°C。
标记方法如下:
离心管正面:1 M IPTG
离心管侧面:配置人缩写+配置年月
AS100(乙酰丁香酮,Acetosyringone,AS)
储存温度:-20℃
配置储存液浓度:100 mM(500×),常用工作浓度:0.2 mM
储存液配置:☛
准确称取196.2 mg AS,用5 mL二甲基亚砜(DMF)直接溶解,并定容至10 mL,分装0.5 mL/管,于-20℃保存。
标记方法如下:
离心管正面:AS100
离心管侧面:配置人缩写+配置年月
1 M MES(pH 5.6)(25x)
称取42.6 g MES,加入到烧杯中,加入180 mL水,用HCl或NaOH调节pH为5.6,过滤除菌。分装到10 mL的灭菌后的离心管中,-20摄氏度保存。
蛋白酶K10(10 mg/mL蛋白酶K溶液)
储存温度:-20℃
配置方法:准确称取5 mg蛋白酶K粉末加入到1.5 mL离心管中,加入灭菌后的0.5 mL超纯水将蛋白酶K溶解。
做标记:
离心管正面:蛋白酶K10
离心管侧面:配置人缩写+配置年月
放到-20摄氏度公共试剂区域
X-gal20(20 mg/mL X-gal溶液)
储存温度:-20℃,铝箔纸包裹避光保藏
配置方法:
准确称取0.1 g X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D半乳糖苷)粉末加入到洗干净的10 mL离心管中,加入5 mL二甲基甲酰胺(NFM)溶解,配置成20 mg/mL的贮存液(1000×)。
利用0.22 μm针式滤器过滤除菌,分装成0.5mL小份,用铝箔封裹以防因受光照而被破坏,贮存于-20°C。
做标记:
离心管正面:X-gal20
离心管侧面:配置人缩写+配置年月
放到-20摄氏度公共试剂区域
400 mg/L 生物素
准确称取8 mg生物素,溶于20 ml超纯水中,于超净台中用无菌的0.22μm的水相滤膜过滤至灭菌后的1.5 ml离心管中,-20℃保存。
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