核酸纯化：醇沉法

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主笔：于浩、李丝竹、李晓航

前言

大部分情况下我们不需要使用“醇沉DNA”的方法，质粒小提试剂盒、切胶回收或者PCR产物回收等试剂盒回收的DNA完全可以满足我们进行PCR、DNA分析、酶切、连接等操作的需求。
少数情况下我们需要高浓度的DNA，实验室通常不会准备这种试剂盒，如果用PCR产物回收试剂盒回收后再浓缩步骤比较繁琐。例如酵母转化过程中的DNA的浓缩、大提质粒、EDTA法提取基因组DNA等操作。在实验步骤的最后往往要进行DNA的醇沉。
实验室测试了不同的实验方案，不同的沉淀剂，常温和低温沉淀等，并对这些方法进行比较分析，最终选择了异丙醇沉淀法。
无水乙醇会从空气中吸水，这会使得其浓度降低并影响测序结果，因此不能整瓶使用长时间开口放置，应该分装后使用（位于储存液架子上）。

1、试剂

70%乙醇、TE缓冲液（配置方法参考：常见试剂配置方法）

异丙醇

1.5 mL离心管

2、仪器设备

高速冷冻离心机、金属浴

1、向待沉淀的DNA中加入2/3体积（4℃）预冷的异丙醇，充分颠倒混匀后，放到-20摄氏度2 h以上。

很多试验方法中DNA沉淀都是在-80摄氏度沉淀1 h，或者在-20摄氏度沉淀过夜。

-80℃沉淀需要反复打开-80℃冰箱，造成冰箱结霜严重。过夜沉淀太浪费实验，经实验验证-20℃沉淀2 h能够对DNA进行有效沉淀。

2、4℃，12000 rpm离心10 min，弃上清。【在底部应该有白色沉淀】

3、用300 μL 4℃预冷的70%乙醇洗涤沉淀（重悬沉淀），4℃，12000 rpm离心10 min，弃上清。

4、弃上清，空气干燥，直至乙醇完全挥发，至DNA的白色刚刚消失（干燥时间过长不利于DNA的溶解）。

5、加入20 μL的ddH2O溶解DNA。

根据实验需求选择加入，如果是提取基因组DNA建议加入TE缓冲液溶解，便于DNA样本的长期稳定保存。如果是转化或者酶切建议加入ddH2O。

6、60摄氏度水浴1 h，期间取出涡旋振荡，并瞬离把TE缓冲液离心到底部。

或者4摄氏度过夜溶解

7、利用超微量分光光度计测定浓度，并取1 uL进行琼脂糖凝胶电泳。