大肠杆菌超级感受态细胞热激转化方法

主笔：姚型东，于浩

参考：感受态说明书

注意事项

1、实验室转化实验不多建议直接购买生物公司制作的超级感受态细胞，当然也可以自己制作感受态细胞，自制的超级感受态细胞使用前一定要测定转化效率，最好是跟商业化的感受态细胞一起比较确定转化效率。

2、要严格按照无菌操作进行实验，防止污染出现假阳性。

3、感受态细胞与重组质粒或混合液混匀时一定要轻轻拨弄离心管，不能吸打混匀和震荡混匀。

1、大肠杆菌感受态细胞（DH5α等）（公司购买，或者自制的超级感受态细胞），待转化DNA；

2、LB平板（含抗性）、LB液体培养基（-20℃分装好的1 mL）；

3、1 mL枪头，10 µL枪头，移液枪，冰盒，涂布棒。

4、恒温水浴锅，超净工作台。

1、感受态细胞于冰上自然解冻（5-10 min），待转化DNA于冰上提前预冷（解冻），从冰箱中取出装有1 mL LB培养基的离心管，放到37℃培养箱中预热；

如使用已经准备好的平板，需要在37℃培养箱中预热

2、取待转化DNA（不要超过10 µL）于100 µL感受态细胞中，轻轻拨弄混匀（一定要充分混匀），冰上静置30 min；

2、42℃水浴热激90s后，立即置于冰上静置2-3 min；

整个过程要保证不要剧烈震荡，如使用循环水浴锅进行热激转化，务必关掉循环水。

3、于超净工作台中加入37℃预热后的900 µL LB液体培养基（不添加抗生素），37℃摇床震荡恢复1 h（~150 rpm/min）；

4、在恢复培养的时间倒平板（加入相应抗生素），对玻璃棒进行灼烧灭菌；

5、5000 rpm离心5 min，于超净工作台中弃上清，离心管中保留~100 µL液体，利用残留的液体重悬菌体；

重悬过程要轻吸慢打，不能剧烈吸打，防止污染。

6、将重悬菌液吸取至LB平板中央，使用灭菌后的玻璃棒轻轻涂匀；