常见溶液、缓冲液配制方法

注意事项

试剂使用完毕后再进行配置，配置时把原有的试剂丢弃，或者转移到其他的小瓶中自用。

配置完毕后要写明配置人和配置时间，用美纹纸进行标记。

同时在瓶盖和瓶身上面进行标记。

本实验方案所说的M是mol/L的简称。

20×PBS缓冲液（0.2 M）

储存温度：室温存放

配置方法（1 L）：

每次配置1 L，装到1L蓝盖瓶中，用1 L烧杯溶解调节pH，蓝盖瓶中原来的溶液丢弃清洗干净，所有容器用蒸馏水清洗干净，。

160 g NaCl、4 g KCl、28.4 g Na2HPO4【或者71.6 g Na2HPO4▪12H2O】、4.8 g KH2PO4溶解于800 mL蒸馏水中。调节pH至7.4。

用量筒定容至1 L，121摄氏度灭菌后，室温放置。

做标记：

贴上标签，写明配置人和配置时间。

1×PBS缓冲液（pH 7.4）（0.01 M）

利用20×PBS缓冲液稀释20倍配制。

1L中含有：8 g NaCl、0.2 g KCl、1.42 g Na2HPO4、0.24 g KH2PO4，pH 7.4。

137 mM NaCl、10 mM Na2HPO4、1.76 mM KH2PO4、2.7 mM KCl

备注：通常磷酸盐缓冲液的浓度是指缓冲液中磷酸根离子的浓度，但是PBS中的磷酸根经计算之后并不是标注的浓度，这里的浓度是按照约定俗成的浓度来标注。

1 M Tris-HCl缓冲液（pH 8.0）

储存温度：室温存放

配置方法（500 mL）：

每次配置500 mL，用1 L烧杯溶解调节pH，所有容器用超纯水清洗干净，500 mL蓝盖瓶中原来的溶液丢弃，清洗干净。

称取60.5 g Tris碱 [Tria-base] [三羟甲基氨基甲烷]，加入400 mL超纯水。用浓盐酸调节pH至8.0。

加蒸馏水定容至500 mL，加入到1 L的蓝盖瓶中。

做标记：

贴上标签，写明配置人和配置时间。

1 M Tris-HCl缓冲液（pH 7.5）

每次配置500 mL，用1 L烧杯溶解调节pH，所有容器用超纯水清洗干净，500 mL蓝盖瓶中原来的溶液丢弃，清洗干净。

称取60.5 g Tris碱 [Tria-base] [三羟甲基氨基甲烷]，加入400 mL超纯水。用浓盐酸调节pH至7.5。

加蒸馏水定容至500 mL。

贴上标签，写明配置人和配置时间。

0.5 M EDTA缓冲液（pH 8.0）

每次配置500 mL，用1 L烧杯溶解调节pH，所有容器用超纯水清洗干净，500 mL蓝盖瓶中原来的溶液丢弃，清洗干净。

称取73.06 g EDTA (乙二胺四乙酸)，加入400 mL超纯水（不溶），用5 M NaOH调节pH至8.0，用蒸馏水定容至500 mL。

或者

称取93.06 g 乙二胺四乙酸二钠盐二水，加入450 mL蒸馏水，用5 M NaOH调节pH至8.0，用蒸馏水定容至500 mL。

贴上标签，写明配置人和配置时间。

10%SDS溶液

每次配置200 mL，所有容器必须要用超纯水清洗干净，原来瓶子中的溶液丢弃，配置用超纯水配置。

准确称取20 g SDS粉末（注意配置的时候带口罩，SDS粉末容易散开）加入到洗干净的烧杯中，加入180 mL超纯水，用磁力搅拌器搅拌混匀，利用洗干净的玻璃量筒定容到200 mL，装入500 mL玻璃蓝盖瓶中。

贴上标签，写明配置人和配置时间。

CTAB抽提液

每次配置500 mL，所有容器必须要用超纯水清洗干净，原来瓶子中的溶液丢弃，配置用超纯水配置。

准确称取25 g NaCl和10 g的CTAB加入到洗干净的1 L的玻璃烧杯中，加入400 mL超纯水，加入50 mL 1 M Tris-HCl （pH 8.0），加入20 mL 0.5 M EDTA缓冲液，用转子搅拌均匀，使得CTAB和NaCl溶解。利用洗干净的玻璃量筒定容到500 mL。

贴上标签，写明配置人和配置时间。。

室温中可以保存几年稳定，分装到100 mL的小瓶中使用。

2% (w/v) CTAB(十六烷基三乙基溴化铵)、100 mM Tris-HCl，pH 8.0、20 mM EDTA，pH 8.0、5% NaCl（有文献报道是1.4 M）

饱和硫酸铵溶液(4℃)

在70水中加入硫酸铵不断搅拌至饱和，将饱和硫酸铵溶液利用布氏漏斗将不溶物过滤出来，在4摄氏度静置，直至有晶体析出为止（过饱和），上清即为饱和硫酸铵溶液，4摄氏度冰箱保存。

贴上标签，写明配置人和配置时间。

TE Buffer（pH 8.0）

10 mM Tris-HCl，1 mM EDTA，pH 8.0【用于保存DNA更稳定】

将100 mL的蓝盖瓶中原来剩余的TE Buffer倒掉，用蒸馏水冲洗干净。

准确吸取0.5 mL 1 M Tris-HCl (pH 8.0)、0.1 mL 0.5 M EDTA-Na (pH 8.0)，49.5 mL超纯水，加入到洗净的100 mL的蓝盖瓶中。

贴上标签，写明配置人和配置时间。

高盐TE缓冲液

10 mM Tris-HCl，1 mM EDTA，1 M NaCl，pH 8.0

储存温度：室温中可以保存几年稳定

配置方法（50 mL）：

将100 mL的蓝盖瓶中原来剩余的缓冲液倒掉，用蒸馏水冲洗干净。

准确吸取0.5 mL 1 M Tris-HCl (pH 8.0)、0.1 mL 0.5 M EDTA-Na (pH 8.0)，49.0 mL超纯水、2.9 g NaCl加入到洗净的100 mL的蓝盖瓶中。

贴上标签，写明配置人和配置时间。

70%乙醇

储存温度：室温存放

配置方法（400 mL）：

原来瓶子中的无水乙醇丢弃，并用蒸馏水冲洗干净蓝盖瓶。

用量筒准确量取280 mL无水乙醇，加入到500 mL蓝盖瓶中，再量取120 mL蒸馏水加入蓝盖瓶。

或者

用量筒准确量取295 mL 95%乙醇，加入到500 mL蓝盖瓶，再量取105 mL的蒸馏水加入蓝盖瓶。

做标记：

贴上标签，写明配置人和配置时间。

6 M Urea（6 mol/L尿素）

储存温度：RT

配置方法（200 mL）：

称取72.1 g尿素，加入到洗干净的500 mL烧杯中，加入150 mL蒸馏水将尿素溶解，利用量筒定容到200 mL。

将布氏漏斗用蒸馏水清洗干净，利用两层滤纸对溶解的尿素进行过滤，过滤两遍。【尿素杂质较多，这个步骤是必须的】

将过滤后的6 M Urea加入到250 mL的蓝盖瓶中。

做标记：

用美纹纸标签进行标记，写明配置人和配置时间

8 M Urea（8 mol/L尿素）

储存温度：RT

配置方法（200 mL）：

称取96.1 g尿素，加入到洗干净的500 mL烧杯中，加入150 mL蒸馏水将尿素溶解，利用量筒定容到200 mL。

将布氏漏斗用蒸馏水清洗干净，利用两层滤纸对溶解的尿素进行过滤，过滤两遍。【尿素杂质较多，这个步骤是必须的】

将过滤后的8 M Urea加入到250 mL的蓝盖瓶中。

做标记：

用美纹纸标签进行标记，写明配置人和配置时间

6 M GdmCl（6 mol/L盐酸胍）

储存温度：RT

配置方法（200 mL）：

称取114.6 g盐酸胍，加入到洗干净的500 mL烧杯中，加入150 mL蒸馏水将盐酸胍溶解，利用量筒定容到200 mL。

将布氏漏斗用蒸馏水清洗干净，利用两层滤纸对溶解的盐酸胍进行过滤，过滤两遍。【盐酸胍杂质较多，这个步骤是必须的】

将过滤后的8 M GdmCl加入到250 mL的蓝盖瓶中。

做标记：

用美纹纸标签进行标记，写明配置人和配置时间

5 M NaOH（5 mol/L NaOH溶液）

储存温度：RT

配置方法（100 mL）：【5 M NaOH不能长期存放，NaOH会跟玻璃反应生成硅酸钠，还会跟空气中的CO2反应，因此高浓度NaOH仅用于调节pH，其他需要高纯度NaOH的单独配置】

称取20.0 g氢氧化钠，加入到洗干净的200 mL烧杯中，加入80 mL蒸馏水溶解，利用量筒定容到100 mL，加入到洗干净的100 mL的蓝盖瓶中【蓝盖瓶中原来的NaOH溶液用大量蒸馏水稀释后丢弃】。

做标记：

用美纹纸标签进行标记，写明配置人和配置时间

2 M HCl（2 mol/L盐酸）

储存温度：RT

用蓝盖瓶配置，长期存放在通风橱中，由于盐酸挥发性强，腐蚀性强，因此应该远离金属和易腐蚀的物品。

配置方法（200 mL）：【浓盐酸为12 mol/L】

向250 mL的蓝盖瓶中加入33 mL浓盐酸，一定要用量筒在通风橱中开通风量取，不得使用移液枪。

再向蓝盖瓶中加入167 mL蒸馏水。

做标记：

用美纹纸标签进行标记，写明配置人和配置时间

0.1 M硫酸镍

储存温度：RT

配置方法（200 mL）：

称取3.1 g硫酸镍，加入到500 mL的烧杯中，加入200 mL的蒸馏水溶解。

将布氏漏斗用蒸馏水清洗干净，利用两层滤纸对溶解的盐酸胍进行过滤，过滤两遍。

将过滤后的硫酸镍溶液加入到250 mL的蓝盖瓶中。

做标记：

用美纹纸标签进行标记，写明配置人和配置时间

100 g/L 氯化铵

储存温度：RT（如果发现有絮状沉淀，利用布氏漏斗过滤，装回原瓶）

配置方法（400 mL）：

称取40 g氯化铵，加入烧杯中，加入300 mL整理水溶解，定容至400 mL。将布氏漏斗用蒸馏水清洗干净，利用两层滤纸对溶解的盐酸胍进行过滤，过滤两遍。

将过滤后的硫酸镍溶液加入到500 mL的蓝盖瓶中。

做标记：

用美纹纸标签进行标记，写明配置人和配置时间

2M MgCl2

储存温度：RT

配置方法（200 mL）：

称取19.04 g无水氯化镁，加入到500 mL的烧杯中，加入180 mL的蒸馏水溶解，利用量筒定容至200 mL。

加入到500 mL的蓝盖瓶中。

做标记：

用美纹纸标签进行标记，写明配置人和配置时间

5 M NaCl

储存温度：RT

配置方法（200 mL）：

称取58.4 g氯化钠，加入到500 mL的烧杯中，加入180 mL的蒸馏水溶解，利用量筒定容至200 mL。

加入到250 mL的蓝盖瓶中。

做标记：

用美纹纸标签进行标记，写明配置人和配置时间

50% TCA

储存温度：RT

配置方法（200 mL）：

称取100 g三氯乙酸，加入到洗净的500 mL的烧杯中，加入100 mL的超纯水溶解，利用量筒定容至200 mL。

加入到250 mL的蓝盖瓶中。

做标记：

用美纹纸或标签机进行标记，写明配置人和配置时间

DNS试剂

储存温度：RT

配置方法（1000 mL）：

称取DNS药品3.15 g，氢氧化钠10.5 g，酒石酸钾钠91.0g，于磁力搅拌器上加热且搅拌溶到500 mL蒸馏水中，待溶解后再加入2.5 g重蒸酚（不要用苯酚）和2.5 g亚硫酸钠，继续搅拌溶解，待冷却至室温后，定容至1000 mL。存放于棕色瓶中，7天后使用，有效期6个月。

做标记：

用美纹纸标签进行标记，写明配置人和配置时间

菌落PCR细胞裂解液

用于酵母菌、菌丝体、子实体的菌落PCR用

储存温度：RT

配置方法（500 mL）：

取2.5 mL Triton X-100、1 g NaOH、1 mL 0.5 M EDTA溶液加入到500 mL的烧杯中，加蒸馏水，定容到500 mL。装入500 mL蓝盖瓶。

分装部分到100 mL蓝盖瓶中使用。

称取DNS药品3.15 g，氢氧化钠10.5 g，酒石酸钾钠91.0g，于磁力搅拌器上加热且搅拌溶到500 mL蒸馏水中，待溶解后再加入2.5 g重蒸酚（不要用苯酚）和2.5 g亚硫酸钠，继续搅拌溶解，待冷却至室温后，定容至1000 mL。存放于棕色瓶中，7天后使用，有效期6个月。

做标记：

用美纹纸或标签机进行标记，写明配置人和配置时间

专用试剂

IM诱导培养基储藏液

100×K-buffer

准确称取K2HPO4 40 g，KH2PO4 29 g，加入到烧杯中，加入180 mL超纯水溶解，利用NaOH调pH至7.0，定容到200 mL。

加入到250 mL蓝盖瓶中，做好标记。

100×M-N buffer

MgSO4•7H2O 12.0 g，NaCl 6.0 g，补超纯水并定容至200 mL。

加入到250 mL蓝盖瓶中，做好标记。

100× FeSO4 (0.01% w/v)

称取20 mg硫酸亚铁，加入到250 mL蓝盖瓶中，加入200 mL超纯水溶解。

做好标记。

100× (NH4)2SO4 (5% w/v)

称取10 g硫酸铵，加入200 mL蒸馏水溶解，利用布氏漏斗过滤（垫2层滤纸）2遍。

加入到250 mL蓝盖瓶中，做好标记。

100× Glycerol (50% v/v)

用量筒量取100 mL甘油，加入250 mL蓝盖瓶，再用100 mL超纯水将量筒中甘油溶解转移到蓝盖瓶中。

1000×CaCl2（1% w/v）

准确称取2 g 氯化钙加入250 mL蓝盖瓶中，加入200 mL超纯水，溶解。

做好标记。

10×DNA loading Buffer

琼脂糖凝胶电泳上样loading

储存温度：RT/-20℃

配置方法（10 mL）：

向15 mL的螺口离心管中加入4 mL超纯水、0.5 mL 10% SDS溶液、0.2 mL 0.5M EDTA、25 mg 溴酚蓝（可以再加入25 mg二甲苯晴或者加入10 mg的永固橘黄G染料）。混匀后，用移液枪取3.9 mL的甘油加入到离心管中。利用离心管上面的刻度定容至10 mL。

做标记：

离心管上写明配置的试剂是什么

SDS-PAGE相关试剂配置

10×Protein loading Buffer

SDS-PAGE上样loading，用于SDS-PAGE检测过程中帮助样本蛋白进入胶孔中。

储存温度：RT/-20℃

配置方法（10 mL）：

向15 mL的螺口离心管中加入1 mL 0.5M Tris-HCl（pH 6.8）缓冲液、2 mL 10% SDS溶液、10 mg溴酚蓝、7 mL甘油，利用超纯水定溶至10 mL。

涡旋混匀后分装，留1管放在室温下，其余放到-20℃保存。

配置过程中不需要加入β-mercaptoethanol或者DTT，在进行SDS-PAGE上样前如果样本蛋白没有加入DTT，可以加入1 mM的DTT（1 M的DTT储藏液在-20℃）

做标记：

离心管上写明：10×蛋白Loading

4×分离胶Buffer (pH 8.8)

储存温度：4°C

配置方法（200 mL）：

1.5 M Tris-HCl，pH 8.8

称取36.4 g Tris-base 溶于160 mL超纯水，利用浓盐酸调节pH至 8.8，加入超纯水定容到200 mL，装入250 mL蓝盖瓶，4°C贮存。

做标记：

用美纹纸或标签机进行标记，写明配置人和配置时间

4×浓缩胶Buffer (pH 6.8)

储存温度：4°C

配置方法（200 mL）：

0.5 M Tris-HCl，pH 6.8

称取12 g Tris-base 溶于160 mL超纯水，利用浓盐酸调节pH至 6.8，加入超纯水定容到200 mL，装入250 mL蓝盖瓶，4°C贮存。

做标记：

用美纹纸或标签机进行标记，写明配置人和配置时间

10×电泳缓冲液

储存温度：4°C

配置方法（1 L）：

试剂加入顺序很重要！

向1 L或者2L的烧杯中加入30.3 g Tris-base，144 g甘氨酸，10 g SDS，加入800 mL的蒸馏水，利用磁力搅拌器将试剂溶解。

利用量筒定溶至1 L，4°C贮存。

做标记：

用美纹纸或标签机进行标记，写明配置人和配置时间

10%（w/v）APS

储存温度：4℃

配置方法（1 mL）：

过硫酸铵试剂应该放在4℃。

称取0.1 g的过硫酸铵到1.5 mL的离心管中，将离心管放到4摄氏度（或者-20℃）进行保存。

使用时取出一个离心管加入1 mL的超纯水，并在离心管上写上配置时间，放到4摄氏度保存，新配置的过硫酸铵可以使用1个月，超期需要重新取出一管来进行配置。

做标记：

离心管上写明配置时间（加入超纯水的时间）

SDS-PAGE胶染色液

储存温度：RT

配置方法（1 L）：

试剂加入顺序很重要！

将2.5 g考马斯亮蓝R-250先溶解于450 mL甲醇中，完全溶解后，加入100 mL乙酸并混合均匀，最后加入450 mL蒸馏水混合均匀。

做标记：

用美纹纸或标签机进行标记，写明配置人和配置时间

SDS-PAGE胶脱色液

储存温度：RT

配置方法（1 L）：

向1 L的量筒中加入250 mL的95%乙醇，再加入80 mL的冰乙酸，加入蒸馏水定溶至1 L。

做标记：

用美纹纸或标签机进行标记，写明配置人和配置时间