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注意事项
如果不做特殊说明,液体培养基装三角瓶标定最大容量的五分之一,固体培养基装五分之二【比如250 mL三角瓶液体装50 mL,固体装100 mL】
常用培养基
PDA/PDB培养基:真菌培养常用培养基
不做特殊说明,一律用土豆进行PDA或者PDB的配置!!!
1、用马铃薯配制
PDA固体培养基:
准确称取马铃薯200g、将土豆削皮洗净,切小块(~5 mm直径),放到不锈钢锅中,加入1 L蒸馏水,大火煮沸,改小火煮20 min,用8层纱布过滤,固体丢弃,保留液体。
向液体中加入葡萄糖 20g,溶解后 利用蒸馏水定容到1L【PDB液体培养基】。
根据需要分装到三角瓶中,向三角瓶中按照毎100 mL培养基加入2 g琼脂,高压蒸汽灭菌。
2、斜面配置
按照需要配置斜面的数量,取出一定体积的PDB液体培养基,按照毎100 mL培养基加入2 g琼脂,煮沸使得琼脂粉溶解。
将溶解后的PDA加入到试管中,高压蒸汽灭菌。
灭菌后请及时取出摆放斜面。
2、用购买的“PDA培养基”配制(特殊实验需求可以使用PDA粉)
不同公司的PDA粉配置相差很大,下面以美国BD Difco公司的Potato Dextrose Agar,货号#213400作为例子
准确称取39 g PDA培养基粉末,加入到1 L的蒸馏水中,高压蒸汽灭菌后使用。
食用菌培养基
综合PDA培养基:真菌培养常用培养基
200 g马铃薯煮汁(具体参考PDA培养基配置),葡萄糖 20克, 琼脂 18克,磷酸二氢钾 3克 ,硫酸镁 1.5克, 维生素(VB1)10 mg 。
先配制20%马铃薯煮汁,方法同上。在煮汁中加入上述各种组分,加热溶解后补足水分,调整pH值到6,定容到1 L。分装,灭菌,备用。
注意:
维生素B1使用“维福佳维生素B1片100片”,每片10 mg,如果配置不足1L,可以直接加入一片。
食用菌遗传转化用培养基
YMG培养基
配置200 mL固体YMG培养基:
准确称取麦芽提取物Malt extract 2 g,葡萄糖Glucose 2 g,酵母提取物Yeast extract 0.2 g,补去离子水200 mL,分装100 mL/瓶(每瓶加入2 g琼脂粉)。
1 L YMG培养基含有:
麦芽提取物Malt extract 10 g,葡萄糖Glucose 10 g,酵母提取物Yeast extract 1 g,(固体培养基加琼脂20 g)
IM诱导培养基(Induction Media IM)(1L)
IM培养基现用现配,用多少配多少,按照下面的表格进行配置:
试剂 | 体积/重量 | 体积/重量 | 体积/重量 | 体积/重量 |
---|---|---|---|---|
总体积 | 100 mL | 200 mL | 500 mL | 1000 mL |
100×K-buffer | 1 mL | 2 mL | 5 mL | 10 mL |
100×M-N buffer | 1 mL | 2 mL | 5 mL | 10 mL |
100×FeSO4 | 1 mL | 2 mL | 5 mL | 10 mL |
100×(NH4)2SO4 | 1 mL | 2 mL | 5 mL | 10 mL |
100×Glycerol | 1 mL | 2 mL | 5 mL | 10 mL |
1000×CaCl2 | 0.1 mL | 0.2 mL | 0.5 mL | 1 mL |
Glucose | 0.2 g | 0.4 g | 1 g | 2 g |
用HCl或NaOH调节pH为5.6【pH试纸调节就行】 |
装到三角瓶中,按照需要加入琼脂,高压蒸汽灭菌。
液体IM放到4℃冰箱保存,3天内使用完。
使用前添加过滤灭菌的1 M MES(加1/25,每100 mL加入4 mL),添加AS100(加1/500,每100 mL加入0.2 mL)【1 M MES、AS100在-20℃保存】。
储存液配置方法见:常见溶液缓冲液配置
酵母培养基
YPD培养基
YPD液体培养基(酵母):准确称取酵母膏10 g、蛋白胨20 g、葡萄糖20 g于1 L水中,搅拌均匀,分装到三角瓶灭菌;
YPD固体培养基(酵母):准确称取酵母膏10 g、蛋白胨20 g、葡萄糖20 g于1 L水中,搅拌均匀,向三角瓶中按照毎100 mL培养基加入2 g琼脂粉,分装到三角瓶灭菌。
MD固体培养基:酵母筛选培养基
MD固体培养基:准确称取无氨基酵母氮源(YNB) 13.4 g,葡萄糖10 g,加蒸馏水定容到1 L,用玻璃棒搅拌至澄清,向三角瓶中按照每100 mL培养基加入2 g琼脂,分装到三角瓶,每瓶分装100 ml,121℃高压蒸汽灭菌20 min,用前添加生物素。
生物素添加:将MD固体培养基溶解后,与超净工作台中降温,待温度达到45-50摄氏度时,按照每升另外加入灭菌的400 mg/L生物素1 mL,摇匀之后马上倒板使用。
配好后2 h内必须灭菌,否则就会变质,尤其是夏天!!!
BMGY培养基:酵母活化培养基
BMGY培养基:准确称取YNB 13.4 g,酵母粉10 g,蛋白胨20 g,甘油10 g,加入900 ml蒸馏水,用玻璃棒搅拌至澄清,分装到三角瓶,每瓶分装22.5 ml,121℃高压蒸汽灭菌20 min。
使用前:在超净台中加入0.1 M pH6.0 磷酸盐缓冲液至终浓度为 0.01 M并且按照每升另外加入灭菌的400 mg/L 生物素 1 mL后使用。(现用现加)
配好后2 h内必须灭菌,否则就会变质,尤其是夏天!!!
BMMY培养基:酵母诱导培养基
BMMY培养基:准确称取YNB 13.4 g,酵母粉10 g,蛋白胨20 g,加入900 ml蒸馏水,用玻璃棒搅拌至澄清,分装到三角瓶,每瓶分装45 ml,121℃高压蒸汽灭菌20 min。
使用前:使用前:在超净台中加入0.1 M pH6.0 磷酸盐缓冲液至终浓度为 0.01 M并且按照每升另外加入灭菌的400 mg/L 生物素 1 mL后使用。(现用现加)接种后每24h于超净台中加入终浓度为1%甲醇进行诱导。
甲醇:与超净台中用无菌的0.22μm的有机相滤膜将分析级别的甲醇过滤至灭菌的10 ml离心管中,与-20℃保存。
配好后2 h内必须灭菌,否则就会变质,尤其是夏天!!!
细菌培养基
LB培养基配制:细菌常用培养基、大肠杆菌培养基
1、用“LB肉汤”进行配制
LB液体培养基:准确称取25 g LB肉汤加入到1 L蒸馏水中后灭菌;
LB固体培养基:准确称取25 g LB肉汤,加入到1 L蒸馏水中,分装到三角瓶中,向三角瓶中按照毎100 mL培养基加入2 g琼脂粉后灭菌
2、用蛋白胨、酵母粉、氯化钠进行配制
LB液体培养基:准确称取10 g蛋白胨、5 g酵母粉和10 g氯化钠,加入到1 L蒸馏水中,搅拌均匀至澄清,分装到三角瓶灭菌;
LB固体培养基:准确称取10 g蛋白胨、5 g酵母粉和10 g氯化钠,加入到1 L蒸馏水中,搅拌均匀。将搅拌均匀澄清的培养基分装到三角瓶,向三角瓶中按照毎100 mL培养基加入2 g琼脂粉后灭菌。
配好后2 h内必须灭菌,否则就会变质,尤其是夏天!!!
SOB培养基:感受态制备转化用培养基
SOB培养基:准确称取胰化蛋白胨20 g、酵母提取物5 g、NaCl l0.5 g溶于950 ml去ddH2O中,加10 ml 250 mM KCl溶液,用5 M NaOH 调pH值至7.0,用ddH2O定容1 L,每瓶100 ml分装到三角瓶,121℃灭菌20 min。
注:使用前,每100 mL加入0.5 ml灭菌的2 M MgCl2。
2 M MgCl2溶液:用90 mL去ddH2O溶解20.33 g MgCl2• 6H2O或者24.65 g MgSO4• 7H2O,加蒸馏水至100 mL,高压蒸汽灭菌。
SOC培养基:感受态制备转化用培养基
SOC培养基:准确称取胰蛋白胨20 g、酵母提取物5 g、NaCl l0.5 g溶于950 mL去ddH2O中,加10 mL 250 mM KCl溶液,用5 M NaOH 调pH值至7.0,用ddH2O定容1 L,每瓶100 mL分装到三角瓶,121℃灭菌20 min。
注:使用前,每100 mL加入1 mL灭过菌的1 M氯化镁与2 mL灭菌的1 M葡萄糖。
2 M MgCl2溶液:用90 mL去ddH2O溶解20.33 g MgCl2• 6H2O或者24.65 g MgSO4• 7H2O,加蒸馏水至100 mL,高压蒸汽灭菌。
1 M葡萄糖:18 g葡萄糖溶于足够水中,再用水补足到100 mL,151摄氏度灭菌20 min。
Zobell 2216E培养基:海洋细菌普通培养基
Zobell 2216E培养基:准确称取5 g蛋白胨、1 g酵母粉和0.1 g磷酸铁,加入到1 L陈海水中,搅拌均匀,调PH至7.6,向三角瓶中按照毎100 mL培养基加入1.5-2 g琼脂粉,分装到三角瓶灭菌
M9培养基:细菌敲除用培养基
5×M9 Salts:准确称取Na2HPO4•12H2O 85 g、KH2PO4 15 g、NaCl 2.5 g、NH4Cl 5 g于1 L水中搅拌均匀。
M9 基本培养基:准确称取5×M9 salts 200 ml和柠檬酸钠 5 g 于1 L ddH2O中混匀,分装到三角瓶灭菌
MSM培养基配制:环境微生物培养用基础培养基
无机盐液体培养基(MSM):准确称取K2HPO4•3H2O 12.6 g、KH2PO4 3.4 g、Na2SO4 1.0 g、MgSO4•7H2O 0.2 g以及微量金属盐溶液1 ml于1 L水(一定要用去离子水)中,pH7.0,分装到三角瓶,121℃灭菌20 min。
无机盐固体培养基(MSM):准确称取K2HPO4•3H2O 12.6 g、KH2PO4 3.4 g、Na2SO4 1.0 g、MgSO4•7H2O 0.2 g以及微量金属盐溶液1 ml于1 L水(一定要用去离子水)中,pH7.0,向三角瓶中按照毎100 mL培养基加入2 g琼脂,分装到三角瓶,121℃灭菌20 min。
注:可以在配好后加入终浓度为0.1 mM的稀盐酸促溶。
母液稀释(一定要用去离子水):
体积 | 1 L | 500 mL | 2 L | 200 mL |
---|---|---|---|---|
20×无机盐 | 50 mL | 25 mL | 100 mL | 10 mL |
2000×Mg2+ | 0.5 mL | 0.25 mL | 1 mL | 0.1 mL |
2000×无机盐 | 0.5 mL | 0.25 mL | 1 mL | 0.1 mL |
蒸馏水 | 950 mL | 475 mL | 1.9 L | 190 mL |
20×无机盐:
1 L中含有252 g K2HPO4•3H2O,68 g KH2PO4,20 g Na2SO4
2000×Mg2+:
1 L中含有400 g MgSO4•7H2O
金属离子母液(2000×)1 L中含有:
0.05 g CaCl2•2H2O, 0.05 g CuCl2•2H2O, 0.008 g MnSO4•H2O, 0.04 g FeSO4•7H2O, 0.05 g ZnSO4, 0.1 g Na2MoO4•2H2O, 0.05 g Na2WO4•2H2O, 0.038 g CoCl2•6H2O, 0.02 g MnCl2•4H2O, 0.0124 g H3BO3。
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