注意事项

如果不做特殊说明，液体培养基装三角瓶标定最大容量的五分之一，固体培养基装五分之二【比如250 mL三角瓶液体装50 mL，固体装100 mL】

常用培养基

PDA/PDB培养基：真菌培养常用培养基

不做特殊说明，一律用土豆进行PDA或者PDB的配置！！！

1、用马铃薯配制

PDA固体培养基：

准确称取马铃薯200g、将土豆削皮洗净，切小块（~5 mm直径），放到不锈钢锅中，加入1 L蒸馏水，大火煮沸，改小火煮20 min，用8层纱布过滤，固体丢弃，保留液体。

向液体中加入葡萄糖 20g，溶解后 利用蒸馏水定容到1L【PDB液体培养基】。

根据需要分装到三角瓶中，向三角瓶中按照毎100 mL培养基加入2 g琼脂，高压蒸汽灭菌。

2、斜面配置

按照需要配置斜面的数量，取出一定体积的PDB液体培养基，按照毎100 mL培养基加入2 g琼脂，煮沸使得琼脂粉溶解。

将溶解后的PDA加入到试管中，高压蒸汽灭菌。

灭菌后请及时取出摆放斜面。

2、用购买的“PDA培养基”配制（特殊实验需求可以使用PDA粉）

不同公司的PDA粉配置相差很大，下面以美国BD Difco公司的Potato Dextrose Agar，货号#213400作为例子

准确称取39 g PDA培养基粉末，加入到1 L的蒸馏水中，高压蒸汽灭菌后使用。

食用菌培养基

综合PDA培养基：真菌培养常用培养基

200 g马铃薯煮汁（具体参考PDA培养基配置），葡萄糖 20克， 琼脂 18克，磷酸二氢钾 3克 ，硫酸镁 1.5克， 维生素（VB1）10 mg 。

先配制20%马铃薯煮汁，方法同上。在煮汁中加入上述各种组分，加热溶解后补足水分，调整pH值到6，定容到1 L。分装，灭菌，备用。

注意：

维生素B1使用“维福佳维生素B1片100片”，每片10 mg，如果配置不足1L，可以直接加入一片。

食用菌遗传转化用培养基

YMG培养基

配置200 mL固体YMG培养基：

准确称取麦芽提取物Malt extract 2 g，葡萄糖Glucose 2 g，酵母提取物Yeast extract 0.2 g，补去离子水200 mL，分装100 mL/瓶（每瓶加入2 g琼脂粉）。

1 L YMG培养基含有：

麦芽提取物Malt extract 10 g，葡萄糖Glucose 10 g，酵母提取物Yeast extract 1 g，（固体培养基加琼脂20 g）

IM诱导培养基（Induction Media IM）（1L）

IM培养基现用现配，用多少配多少，按照下面的表格进行配置：

试剂	体积/重量	体积/重量	体积/重量	体积/重量
总体积	100 mL	200 mL	500 mL	1000 mL
100×K-buffer	1 mL	2 mL	5 mL	10 mL
100×M-N buffer	1 mL	2 mL	5 mL	10 mL
100×FeSO4	1 mL	2 mL	5 mL	10 mL
100×(NH4)2SO4	1 mL	2 mL	5 mL	10 mL
100×Glycerol	1 mL	2 mL	5 mL	10 mL
1000×CaCl2	0.1 mL	0.2 mL	0.5 mL	1 mL
Glucose	0.2 g	0.4 g	1 g	2 g
用HCl或NaOH调节pH为5.6【pH试纸调节就行】

装到三角瓶中，按照需要加入琼脂，高压蒸汽灭菌。

液体IM放到4℃冰箱保存，3天内使用完。

使用前添加过滤灭菌的1 M MES（加1/25，每100 mL加入4 mL），添加AS100（加1/500，每100 mL加入0.2 mL）【1 M MES、AS100在-20℃保存】。

储存液配置方法见：常见溶液缓冲液配置

酵母培养基

YPD培养基

YPD液体培养基（酵母）：准确称取酵母膏10 g、蛋白胨20 g、葡萄糖20 g于1 L水中，搅拌均匀，分装到三角瓶灭菌；

YPD固体培养基（酵母）：准确称取酵母膏10 g、蛋白胨20 g、葡萄糖20 g于1 L水中，搅拌均匀，向三角瓶中按照毎100 mL培养基加入2 g琼脂粉，分装到三角瓶灭菌。

MD固体培养基：酵母筛选培养基

MD固体培养基：准确称取无氨基酵母氮源（YNB） 13.4 g，葡萄糖10 g，加蒸馏水定容到1 L，用玻璃棒搅拌至澄清，向三角瓶中按照每100 mL培养基加入2 g琼脂，分装到三角瓶，每瓶分装100 ml，121℃高压蒸汽灭菌20 min，用前添加生物素。

生物素添加：将MD固体培养基溶解后，与超净工作台中降温，待温度达到45-50摄氏度时，按照每升另外加入灭菌的400 mg/L生物素1 mL，摇匀之后马上倒板使用。

配好后2 h内必须灭菌，否则就会变质，尤其是夏天！！！

BMGY培养基：酵母活化培养基

BMGY培养基：准确称取YNB 13.4 g，酵母粉10 g，蛋白胨20 g，甘油10 g，加入900 ml蒸馏水，用玻璃棒搅拌至澄清，分装到三角瓶，每瓶分装22.5 ml，121℃高压蒸汽灭菌20 min。

使用前：在超净台中加入0.1 M pH6.0 磷酸盐缓冲液至终浓度为 0.01 M并且按照每升另外加入灭菌的400 mg/L 生物素 1 mL后使用。（现用现加）

配好后2 h内必须灭菌，否则就会变质，尤其是夏天！！！

BMMY培养基：酵母诱导培养基

BMMY培养基：准确称取YNB 13.4 g，酵母粉10 g，蛋白胨20 g，加入900 ml蒸馏水，用玻璃棒搅拌至澄清，分装到三角瓶，每瓶分装45 ml，121℃高压蒸汽灭菌20 min。

使用前：使用前：在超净台中加入0.1 M pH6.0 磷酸盐缓冲液至终浓度为 0.01 M并且按照每升另外加入灭菌的400 mg/L 生物素 1 mL后使用。（现用现加）接种后每24h于超净台中加入终浓度为1%甲醇进行诱导。

甲醇：与超净台中用无菌的0.22μm的有机相滤膜将分析级别的甲醇过滤至灭菌的10 ml离心管中，与-20℃保存。

配好后2 h内必须灭菌，否则就会变质，尤其是夏天！！！

细菌培养基

LB培养基配制：细菌常用培养基、大肠杆菌培养基

1、用“LB肉汤”进行配制

LB液体培养基：准确称取25 g LB肉汤加入到1 L蒸馏水中后灭菌；

LB固体培养基：准确称取25 g LB肉汤，加入到1 L蒸馏水中，分装到三角瓶中，向三角瓶中按照毎100 mL培养基加入2 g琼脂粉后灭菌

2、用蛋白胨、酵母粉、氯化钠进行配制

LB液体培养基：准确称取10 g蛋白胨、5 g酵母粉和10 g氯化钠，加入到1 L蒸馏水中，搅拌均匀至澄清，分装到三角瓶灭菌；

LB固体培养基：准确称取10 g蛋白胨、5 g酵母粉和10 g氯化钠，加入到1 L蒸馏水中，搅拌均匀。将搅拌均匀澄清的培养基分装到三角瓶，向三角瓶中按照毎100 mL培养基加入2 g琼脂粉后灭菌。

配好后2 h内必须灭菌，否则就会变质，尤其是夏天！！！

SOB培养基：感受态制备转化用培养基

SOB培养基：准确称取胰化蛋白胨20 g、酵母提取物5 g、NaCl l0.5 g溶于950 ml去ddH2O中，加10 ml 250 mM KCl溶液，用5 M NaOH 调pH值至7.0，用ddH2O定容1 L，每瓶100 ml分装到三角瓶，121℃灭菌20 min。

注：使用前，每100 mL加入0.5 ml灭菌的2 M MgCl2。

2 M MgCl2溶液：用90 mL去ddH2O溶解20.33 g MgCl2• 6H2O或者24.65 g MgSO4• 7H2O，加蒸馏水至100 mL，高压蒸汽灭菌。

SOC培养基：感受态制备转化用培养基

SOC培养基：准确称取胰蛋白胨20 g、酵母提取物5 g、NaCl l0.5 g溶于950 mL去ddH2O中，加10 mL 250 mM KCl溶液，用5 M NaOH 调pH值至7.0，用ddH2O定容1 L，每瓶100 mL分装到三角瓶，121℃灭菌20 min。

注：使用前，每100 mL加入1 mL灭过菌的1 M氯化镁与2 mL灭菌的1 M葡萄糖。

2 M MgCl2溶液：用90 mL去ddH2O溶解20.33 g MgCl2• 6H2O或者24.65 g MgSO4• 7H2O，加蒸馏水至100 mL，高压蒸汽灭菌。

1 M葡萄糖：18 g葡萄糖溶于足够水中，再用水补足到100 mL，151摄氏度灭菌20 min。

Zobell 2216E培养基：海洋细菌普通培养基

Zobell 2216E培养基：准确称取5 g蛋白胨、1 g酵母粉和0.1 g磷酸铁，加入到1 L陈海水中，搅拌均匀，调PH至7.6，向三角瓶中按照毎100 mL培养基加入1.5-2 g琼脂粉，分装到三角瓶灭菌

M9培养基：细菌敲除用培养基

5×M9 Salts：准确称取Na2HPO4•12H2O 85 g、KH2PO4 15 g、NaCl 2.5 g、NH4Cl 5 g于1 L水中搅拌均匀。

M9 基本培养基：准确称取5×M9 salts 200 ml和柠檬酸钠 5 g 于1 L ddH2O中混匀，分装到三角瓶灭菌

MSM培养基配制：环境微生物培养用基础培养基

无机盐液体培养基（MSM）：准确称取K2HPO4•3H2O 12.6 g、KH2PO4 3.4 g、Na2SO4 1.0 g、MgSO4•7H2O 0.2 g以及微量金属盐溶液1 ml于1 L水（一定要用去离子水）中，pH7.0，分装到三角瓶，121℃灭菌20 min。

无机盐固体培养基（MSM）：准确称取K2HPO4•3H2O 12.6 g、KH2PO4 3.4 g、Na2SO4 1.0 g、MgSO4•7H2O 0.2 g以及微量金属盐溶液1 ml于1 L水（一定要用去离子水）中，pH7.0，向三角瓶中按照毎100 mL培养基加入2 g琼脂，分装到三角瓶，121℃灭菌20 min。

注：可以在配好后加入终浓度为0.1 mM的稀盐酸促溶。

母液稀释（一定要用去离子水）：

体积	1 L	500 mL	2 L	200 mL
20×无机盐	50 mL	25 mL	100 mL	10 mL
2000×Mg2+	0.5 mL	0.25 mL	1 mL	0.1 mL
2000×无机盐	0.5 mL	0.25 mL	1 mL	0.1 mL
蒸馏水	950 mL	475 mL	1.9 L	190 mL

20×无机盐：

1 L中含有252 g K2HPO4•3H2O，68 g KH2PO4，20 g Na2SO4

2000×Mg2+：

1 L中含有400 g MgSO4•7H2O

金属离子母液（2000×）1 L中含有：

0.05 g CaCl2•2H2O， 0.05 g CuCl2•2H2O， 0.008 g MnSO4•H2O， 0.04 g FeSO4•7H2O， 0.05 g ZnSO4， 0.1 g Na2MoO4•2H2O， 0.05 g Na2WO4•2H2O， 0.038 g CoCl2•6H2O， 0.02 g MnCl2•4H2O， 0.0124 g H3BO3。